ABSTRACT: Suboptimal LH surges can lead to delayed or absent ovulation during reproductive management programs in cattle. Several signaling pathways may enhance the LH signal, potentially including growth factors. In the present study, we determined whether Fibroblast growth factor 18 (FGF18), which mimics some actions of the LH surge on granulosa cells, may potentiate the action of a suboptimal dose of LH using an established bovine granulosa cell (GC) culture system. Addition of recombinant FGF18 increased the concentration of progesterone (P4) in the culture medium. A combination of LH and FGF18 in the culture medium increased the abundance of mRNA encoding EREG, EGR1 and EGR3, proteins that are early modulators of the LH-induced pre-ovulatory cascade. This study demonstrated that FGF18 may be a co-factor in the regulation of the pre-ovulatory cascade in bovine ovarian granulosa cells.

RESUMO: Os picos de LH abaixo do ideal podem bloquear ou retardar a ovulação durante programas de manejo reprodutivo em bovinos. Várias vias de sinalização podem aumentar o sinal de LH, incluindo em especial fatores de crescimento. No presente estudo, determinamos se o fator de crescimento de fibroblastos 18 (FGF18), que estimula algumas ações do pico de LH nas células da granulosa, pode potencializar a ação de uma dose sub fisiológica de LH em um sistema de cultivo de células da granulosa bovina (GC). A adição de FGF18 recombinante aumentou a concentração de progesterona (P4) no meio de cultura. A combinação de LH e FGF18 no meio de cultura aumentou a abundância de mRNA para EREG, EGR1 e EGR3, proteínas que são moduladoras precoces da cascata pré-ovulatória induzida por LH. Este estudo demonstrou que o FGF18 pode ser um cofator na regulação da cascata pré-ovulatória em células da granulosa bovina.

ABSTRACT: Treatment with prostaglandin F2α (PGF) induces ovulation and increases conception rates in cows, while improving embryo production in buffalos. However, its effect on superovulated cows is unknown. This study verified whether single PGF administration concurrent with artificial insemination (AI) improves fertilization and embryo production rates in superovulated cows. In each replicate, embryo donor cows were equally allocated to two groups: the untreated control and PGF groups. The latter of which received 482 µg of cloprostenol concurrent with the first AI. Each cow (n = 35) was subjected to two superovulations (SOV) in a crossover design (total = 70 embryo collections). In the control and PGF groups, respectively, the observed responses were [median (95% CI)]: 12 (10-18) and 15 (12-18) total structures, 9 (7-11) and 7 (6-10) viable embryos, 1 (0-1) and 1 (1-3) degenerated embryos, and 1 (0-3) and 2 (0-5) oocytes (P > 0.05). In conclusion, single PGF treatment concurrent with the first AI did not affect embryo production in superovulated cows.

RESUMO: A prostaglandina F2α (PGF) pode induzir a ovulação e melhorar tanto a concepção em vacas, como a produção de embriões em búfalas, mas o efeito em vacas superovuladas é desconhecido. Esse estudo teve como objetivo verificar se a administração de uma dose de PGF na inseminação artificial (IA) após a superovulação (SOV) melhora as taxas de fecundação e produção embrionária em vacas. Em cada replicação, vacas doadoras de embriões foram equilibradamente alocadas em dois grupos: controle, não tratado, ou PGF, que recebeu 482 µg de cloprostenol no momento da primeira IA. Cada doadora (n = 35) foi submetida a duas SOV em um delineamento crossover (total = 70 coletas de embriões). Nos grupos controle e PGF, respectivamente, foram observados [medianas (IC 95%)]: 12 (10-18) e 15 (12-18) estruturas totais; 9 (7-11) e 7 (6-10) embriões viáveis; 1 (0-1) e 1 (1-3) embriões degenerados; e 1 (0-3) e 2 (0-5) ovócitos (P > 0,05). Conclui-se que uma única administração de PGF no momento da primeira IA não afeta a produção embrionária de vacas superovuladas.

Abstract Radiotherapy causes destruction of tumor cells, but also threatens the integrity and survival of surrounding normal cells. Then, woman submitted to irradiation for cancer treatment may present permanent ovary damage, resulting in impaired fertility. The objective of this study was to investigate the effects of therapeutic doses of ionizing radiation (IR), used for ovarian cancer treatment in humans, on bovine cumulus-oocyte complexes (COCs) as experimental model. Bovine ovaries were exposed to 0.9 Gy, 1.8 Gy, 3.6 Gy or 18.6 Gy IR, and then COCs were collected and used to evaluate: (a) oocyte nuclear maturation; (b) presence of phosphorylated H2A.X (γH2AX), as an indicator of DNA double-strand breaks (DSBs); and (c) expression of genes involved in DNA repair (TP53BP1, RAD52, ATM, XRCC6 and XRCC5) and apoptosis (BAX). The radiation doses tested in this study had no detrimental effects on nuclear maturation and did not increase γH2AX in the oocytes. However, IR treatment altered the mRNA abundance of RAD52 (RAD52 homolog, DNA repair protein) and BAX (BCL2-associated X protein). We conclude that although IR doses had no apparent effect on oocyte nuclear maturation and DNA damage, molecular pathways involved in DNA repair and apoptosis were affected by IR exposure in cumulus cells.

Abstract Estradiol cypionate (EC) or GnRH have been widely used for ovulation induction in timed embryo transfer (TET). EC administration increases the proportion of cows that show estrus, whereas GnRH promotes more synchronized ovulations. The aim of the present study was to evaluate the potential beneficial effects of combining EC and GnRH in TET. In experiment 1, no difference was observed on serum progesterone concentrations on Day 6 and 13 after GnRH treatment between GnRH and EC+GnRH groups. In experiment 2, pregnancy per embryo transfer (P/ET) did not differ (p = 0.69) between GnRH (62.8%) and EC+GnRH (58.7%) groups. In conclusion, combining EC and GnRH for ovulation induction does not increase progesterone secretion and pregnancy rate after TET in cattle.

Abstract The identification of mutations in the genes encoding bone morphogenetic protein 15 (BMP15) and growth and differentiation factor 9 (GDF9) associated with phenotypes of sterility or increased ovulation rate in sheep aroused interest in the study of the role of local factors in preantral and antral folliculogenesis in different species. An additive mutation in the BMP15 receptor, BMPR1b, which determines an increase in the ovulatory rate, has been introduced in several sheep breeds to increase the number of lambs born. Although these mutations indicate extremely relevant functions of these factors, the literature data on the regulation of the expression and function of these proteins and their receptors are very controversial, possibly due to differences in experimental models. The present review discusses the published data and preliminary results obtained by our group on the participation of local factors in the selection of the dominant follicle, ovulation, and follicular atresia in cattle, focusing on transforming growth factors beta and their receptors. The study of the expression pattern and the functionality of proteins produced by follicular cells and their receptors will allow increasing the knowledge about this local system, known to be involved in ovarian physiopathology and with the potential to promote contraception or increase the ovulation rate in mammals.

Abstract The transforming growth factors beta (TGFβ) are local factors produced by ovarian cells which, after binding to their receptors, regulate follicular deviation and ovulation. However, their regulation and function during corpus luteum (CL) regression has been poorly investigated. The present study evaluated the mRNA regulation of some TGFβ family ligands and their receptors in the bovine CL during induced luteolysis in vivo. On day 10 of the estrous cycle, cows received an injection of prostaglandin F2α (PGF) and luteal samples were obtained from separate groups of cows (n= 4-5 cows per time-point) at 0, 2, 12, 24 or 48 h after treatment. Since TGF beta family comprises more than 30 ligands, we focused in some candidates genes such as activin receptors (ACVR-1A, -1B, -2A, -2B) AMH, AMHR2, BMPs (BMP-1, -2, -3, -4, -6 and -7), BMP receptors (BMPR-1A, -1B and -2), inhibin subunits (INH-A, -BA, -BB) and betaglycan (TGFBR3). The mRNA levels of BMP4, BMP6 and INHBA were higher at 2 h after PGF administration (P<0.05) in comparison to 0 h. The relative mRNA abundance of BMP1, BMP2, BMP3, BMP4, BMP6, ACVR1B, INHBA and INHBB was upregulated up to 12 h post PGF (P<0.05). On the other hand, TGFBR3 mRNA that codes for a reservoir of ligands that bind to TGF-beta receptors, was lower at 48 h. In conclusion, findings from this study demonstrated that genes encoding several TGFβ family members are expressed in a time-specific manner after PGF administration.

RESUMO: Estudos anteriores avaliaram o efeito de diferentes procedimentos reprodutivos sobre marcadores de desconforto em bovinos e ovinos. Tais estudos podem estimular a adoção de técnicas que preservem o bem-estar animal. Entretanto, os marcadores comumente utilizados apresentam alta influência de fatores externos. Para contornar isso, a avaliação conjunta de diferentes parâmetros sistêmicos pode ser utilizada para determinar com maior precisão a presença de estresse, dor ou inflamação, como cortisol, proteínas de fase aguda, a bradicinina e a substância P. O objetivo desta revisão é relacionar potenciais marcadores de inflamação e estresse, discutindo como e quando são regulados frente aos estímulos em bovinos e ovinos. Ainda, pretende-se revisar de que forma procedimentos reprodutivos com diferentes graus de invasividade acarretam em desconforto, fornecendo informações para a elaboração de estratégias que possibilitem minimizá-lo.

ABSTRACT: Previous studies have evaluated the effects of different reproductive procedures on discomfort markers in sheep and cattle. Such studies may help stimulate the adoption of techniques that are more beneficial for animal welfare. However, markers that are commonly used to evaluate discomfort are highly influenced by external factors. To overcome this, several systemic markers can be evaluated to more precisely identify stress, pain, and inflammation. Such markers include cortisol, acute phase proteins, bradykinin, and substance P. We aimed to review the potential markers of stress, pain, and inflammation, and discuss how and when they are regulated after different stimuli related to reproductive procedures in cattle and sheep. Furthermore, we aimed to review how reproductive procedures with different degrees of invasiveness cause stress and provide information that may help develop strategies to limit animal discomfort.

RESUMO: Como a duração da gestação de suínos pode ter ampla variação, é comum a ocorrência de partos antecipados ou gestações prolongadas. Isso aumenta as chances de partos sem assistência e leva a uma grande variação de idade dos leitões dentro do lote de produção. Portanto, a supervisão do parto é indispensável para reduzir as perdas neonatais. Para facilitar o auxílio aos leitões, a indução do parto com prostaglandina F2α (PGF) é eficaz e amplamente utilizada, sendo indicada para concentrar os partos em momentos mais adequados, preferencialmente durante o horário com maior disponibilidade de colaboradores. Uma alternativa viável é manipular o momento do parto, através da manutenção de níveis plasmáticos elevados de progestágeno durante o final da gestação, a fim de evitar partos antecipados. Formas eficientes de evitar o parto através de suplementação oral de progestágenos foram descritas há décadas, mas apenas recentemente tem sido cogitada a utilização comercial. A presente revisão aborda estudos disponíveis na literatura relacionados ao protelamento do parto, incluindo a utilização de dispositivos intravaginais (DIVs) impregnados com progestágeno. São poucos os dados disponíveis relacionados ao uso de progestágenos na gestação com índices produtivos e reprodutivos. Portanto, alguns pontos ainda devem ser melhor avaliados, especialmente com relação à determinação da sincronia dos partos após o fim da suplementação com progestágenos, à viabilidade dos neonatos e à fertilidade subsequente das fêmeas antes da ampla adoção desta técnica.

ABSTRACT: Gestation length in swine has a considerable amplitude and both early and delayed parturition are common. This variation increases the occurrence of unassisted farrowing and could lead to a wide-ranging age at weaning for piglets born from one batch. Supervision of sow parturition is crucial to reduce mortality of neonate piglets. To facilitate assistance, induction of farrowing using prostaglandin F2α (PGF) has been widely used in batch farrowing systems, whereby synchronization would concentrate the time of farrowing, allowing for better organization of employees. However, a viable alternative method that can be implemented to manage farrowing is to sustain high progestagen levels in the final days of gestation and, consequently, prevent early parturition. Efficient techniques to delay farrowing such as using oral progestagen supplementation have been previously described, but are only recently being considered for commercial use. The present manuscript reviews publications regarding delaying parturition and discusses the use of intravaginal devices (IVDs) containing progestagen. There is limited data addressing the effect of progestagen treatment during gestation on productive and reproductive performance. Therefore, future studies should focus on improving synchronization protocols following progestagen supplementation and evaluating piglet viability and sow fertility, before widely using progestagen supplementation to manipulate parturition.

RESUMO: O diagnóstico de gestação é uma ferramenta importante no manejo da propriedade. A ultrassonografia é a principal técnica utilizada no diagnóstico de prenhez em ovelhas. Como alternativa, o radiomunoensaio (RIA) permite acurácia e a detecção precoce de proteínas associadas à prenhez (PAGs) no sangue. No entanto, as técnicas radioativas, como o RIA, têm sido cada vez mais desaconselháveis, devido ao risco ambiental. A homologia entre PAGs de ovinos e bovinos é alta, e os kits de ELISA utilizados para a detecção de PAGs em bovinos são mais seguros do que RIA. Portanto, este estudo teve como objetivo avaliar a viabilidade de detecção de PAGs no soro ovino para diagnóstico de gestação em soro ovino, utilizando um kit de ELISA produzido para bovinos. A sensibilidade e a especificidade do kit de ELISA foram de 93,5% e 98,9%, respectivamente, enquanto que os valores preditivos positivo e negativo foram de 99,0% e 93,1%, respectivamente, em comparação com a ultrassonografia (utilizada como referência). As PAGs atingiram concentrações consistentemente detectáveis no soro ovino em torno de 33 dias após o acasalamento. A acurácia do teste de ELISA foi de 96,1% a partir de 33 dias de gestação até o parto. As PAGs ainda eram detectáveis sete dias pós-parto. No entanto, a partir de 21 dias após o parto, as PAGs da prenhez anterior já não eram detectadas no soro. Em conclusão, o kit de ELISA bovino pode detectar a prenhez com precisão em ovelhas a partir de 33 dias após o acasalamento, e os níveis de PAGs da gestação anterior não são detectados a partir de 21 dias pós-parto. O teste de ELISA avaliado é uma ferramenta confiável para o diagnóstico de gestação em ovelhas em estágios aleatórios e como exame complementar no início da gestação.

ABSTRACT: Pregnancy diagnosis is an important tool for farm management. Ultrasonography is the main technique used for pregnancy diagnosis in ewes. As an alternative, radioimmunoassay (RIA) allows accurate and early detection of pregnancy-associated glycoproteins (PAGs) in sheep blood. However, radioactive-based techniques, as RIA, have been increasingly inadvisable due to environmental risk. Homology between ovine and bovine PAGs is high, and ELISA kits used for PAGs detection in cattle are safer than RIA. Thus, this study aimed to evaluate the feasibility of PAGs detection for pregnancy diagnosis in sheep serum samples using an ELISA kit produced for cattle. The sensitivity and specificity of the ELISA kit were 93.5% and 98.9%, respectively, whereas positive and negative predictive values were 99.0% and 93.1%, respectively, in comparison to ultrasonography diagnostic (control). PAGs reached consistently detectable concentrations in ovine serum around 33 days after mating. Accuracy of the ELISA test was 96.1% from 33 days of pregnancy until lambing. After parturition, PAGs were still detectable seven days post-lambing. However, from 21 days post-parturition, PAGs from the previous pregnancy were no longer detected in serum samples. In conclusion, the bovine ELISA kit can accurately detect pregnancy in sheep 33 days following mating, while PAGs levels from the previous gestation are no longer detected from 21 days post-partum. The evaluated ELISA test is a reliable tool for pregnancy diagnosis in sheep at random stages and as a complementary exam at early gestation.

O presente estudo teve como objetivo avaliar a capacidade crioprotetora das lipoproteínas de baixa densidade (LDL) presentes no plasma de gema de ovo, adicionado ao trihidroxiaminometano (TRIS) para congelar sêmen ovino. Trinta e seis ejaculados foram coletados para formar 12 "pool". Cada alíquota de sêmen foi diluída em TRIS-gema de ovo (TRISG) ou TRIS- plasma de gema de ovo (TRISP) antes de congelar o sêmen. Para a obtenção do plasma da gema de ovo, foi utilizado o método de ultracentrifugação. Após o descongelamento, não houve diferença entre os dois extensores em relação aos parâmetros seminais (motilidade, viabilidade, membrana acrossômica e plasma). No entanto, no Teste de Termo Resistência Lenta (TTRL - 4h/38°C), o sêmen congelado com TRISP resultou no aumento do número de espermatozoides com acrossoma intacto (P<0,032). Conclui-se que o diluente TRISP é uma alternativa para criopreservação do sêmen de carneiros, pois permite uma melhora da característica seminal em relação ao diluente TRIS gema, mas sem a necessidade do processo de purificação das LDL.

The present study aimed to evaluate the cryoprotectant low-density lipoprotein (LDL) present in the plasma of egg yolk added to the extender trihidroxiaminometano (TRIS) for freezing ram semen. Thirty-six ejaculates were collected to form 12 pool. Each aliquot of semen was diluted in TRIS-egg yolk (TRISG) or TRIS-egg yolk plasma (TRISP) before freezing the semen. The plasma of egg yolk was obtained by ultracentrifugation. After thawing, no difference was detected between the two extenders in relation to seminal parameters (motility, viability, plasma membrane and acrosome). However, in the thermal resistance slow test (4h in a water bath at 38°C), the semen frozen with TRISP resulted in higher number of sperm with intact acrosome than those with TRISG (P<0.032). It was concluded that the TRISP extender is an alternative for cryopreservation of ram semen, once it improves the semen characteristics in comparison to TRISG, avoiding the purification process of LDL.

O objetivo deste estudo foi investigar a expressão de RNAm e a localização da proteína Grb10 em complexos cumulusoócito (CCO), oriundos de folículos bovinos em diferentes fases de desenvolvimento. Primeiramente, foi investigada a expressão de RNAm e relacionada com as taxas de maturação. CCOs oriundos de folículos com diâmetro de 1-3, 4-6, 6-8 e >8mm foram utilizados para avaliar a expressão de RNAm por PCR em tempo real e para analisar os estádios de maturação nuclear. Foi observado que os oócitos mais competentes para a progressão meiótica (oriundos de folículos com diâmetro de 6-8 e >8mm; P<0.05) tiveram menor expressão de RNAm para Grb10, quando comparados aos CCOs oriundos de folículos com 1-3 e 4-6mm (P<0.05). Posteriormente, foi realizada a técnica de imunofluorescência em CCOs oriundos de folículos de diferentes tamanhos (1-3, 4-6, 6-8 e >8mm) para investigar a localização da proteína Grb10. As amostras foram incubadas com o anticorpo primário: anti-Grb10 policlonal, produzido em coelho (1:100). O anticorpo primário foi detectado utilizando um anticorpo secundário, IgG anti-coelho, produzido em cabra, conjugado com Alexa Fluor 488 (1:500). A fluorescência foi detectada em todas as amostras analisadas, porém, menos evidente nos CCOs oriundos dos folículos maiores. Os resultados apresentados neste estudo caracterizam o gene Grb10 em CCOs de bovinos e fornecem evidências do seu envolvimento na maturação molecular do oócito.

The objective of this study was to investigate the mRNA expression and protein localization of Grb10 gene in bovine cumulus-oocyte complexes (COCs) from different follicle sizes. Firstly, it was investigated the mRNA expression to correlate with maturation rates. COCs from follicles at 1-3, 4-6, 6-8 and &gt;8mm were used to evaluate Grb10 gene expression by qRT-PCR assay and nuclear maturation rates. It was observed that more competent oocytes (from follicles at 6-8 and &gt;8mm; P&gt;0.05), had lower Grb10 mRNA expression levels when compared to the oocytes from follicles at 1-3 and 4-6mm (P&gt;0.05). After it was performed an immunofluorescence analysis in COCs from different follicle sizes (1-3, 4-6, 6-8 and &gt;8mm) to investigate Grb10 protein localization. Samples were incubated with primary antibody: Polyclonal rabbit anti-Grb10 (1:100). Primary antibody was detected using goat anti-rabbit IgG antibody conjugated with Alexa Fluor 488 (1:500). Positive fluorescence signal was detected in all analyzed samples but less evident in COCs from largest follicles. These results characterized Grb10 gene in bovine COC and provide evidences for its involvement during oocyte molecular maturation.

A terapia celular traz perspectivas encorajadoras à medicina humana e veterinária. Experimentalmente, a manipulação genética permite a marcação e a localização de células alogênicas. Porém, isso torna seu genótipo/fenótipo diferente daquelas usadas clinicamente, sem marcação. Alternativamente, a presença do cromossomo Y possibilita detectar células de doadores machos no organismo de fêmeas. Todavia, a concentração de células transplantadas pode ser mínima em certos tecidos, pela distribuição sistêmica. Neste estudo, foi desenvolvida uma nested-PCR multiplex, visando a aumentar a sensibilidade do diagnóstico de presença/ausência de células derivadas do tecido adiposo (CDTA-Y) e derivadas da fração mononuclear da medula óssea (CFMO-Y) de camundongos machos, em amostras de sangue e de pulmões de camundongos fêmeas, após transplante endovenoso. Quatro fêmeas receberam placebo; quatro fêmeas receberam CDTA-Y de dois machos; e quatro fêmeas receberam CFMO-Y de dois machos. A primeira fase da PCR teve dois pares de primers (multiplex): um para amplificação de fragmento do cromossomo Y (SRYout; 300pb); outro para amplificação de fragmento do cromossomo X (gene DXNds3). Na segunda fase da PCR, foi usado um par de primers para amplificação de fragmento de 110pb (SRYinn) interno ao produto amplificado pelo SRYout. O controle interno da reação (gene DXNds3) foi detectado em todas as amostras de DNA testadas, enquanto que o fragmento externo do gene SRY (300pb) foi detectado apenas nas amostras puras de DNA de CDTA-Y e CFMO-Y. O fragmento interno do gene SRY (110pb) foi detectado no sangue e nos pulmões de 100% das receptoras de CDTA-Y e CFMO-Y. A técnica de nested-PCR aumentou a sensibilidade e a segurança do diagnóstico molecular de presença ou ausência de células de camundongos machos em fluidos e tecidos de receptoras fêmeas após transplante endovenoso.

Cell therapy has shown encouraging perspectives for human and veterinary medicine. Experimentally, genetic manipulation allows to mark and locate allogeneic cells. However, this makes their genotype/phenotype different from non-marked cells used clinically. Alternatively, the presence of the Y-chromosome enables male donor cells detection in female organisms. However, the concentration of engrafted cells may be minimal in tissues, due to systemic distribution. In this study, a nested-PCR multiplex test was developed, aiming to increase the sensitivity of the presence/absence diagnosis of male mice adipose-derived (ADSC-Y) and bone marrow mononuclear (BMNC-Y) cells in samples of blood and lungs from females, after endovenous transplantation. Four females received placebos; four females received ADSC-Y from two males; and four females received BMNC-Y from two males. The PCR first-step included two primer sets (multiplex): one for amplification of a Y-chromosome fragment (SRYout; 300bp); the other for amplification of an X-chromosome (DXNds3 gene) fragment. In the PCR second-step, one primer set (SRYinn) was used for amplification of a 110bp fragment, restrained in the SRYout amplification product. The PCR internal control (DXNds3 gene) was detected in all DNA samples, whereas the SRY gene external fragment (300bp) was detected exclusively in ADSC-Y and BMNC-Y pure DNA samples. The SRY gene internal fragment (110bp) was detected in 100% of the blood and lung samples from the ADSC-Y and BMNC-Y female recipients. The nested-PCR technique increased sensitivity and reliability for molecular diagnostic of presence or absence of male mice cells in body fluids and tissues of female recipients after endovenous transplantation.

O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da Angiotensina II (Ang II) sobre a esteroidogenese nas células da teca bovina, cultivadas in vitro. Para isso, células da teca bovina foram obtidas de folículos maiores que 10 mm de diâmetro de ovários oriundos de abatedouro e submetidas a diferentes tratamentos em uma sequência de experimentos. No experimento 1, o perfil de expressão do RNAm de CYP17A1 foi avaliado nas células da teca em resposta ao LH (10ng ml-1) e/ou Ang II (0,1µM) em diferentes momentos de tratamento. No experimento 2, foi investigado o efeito dose-resposta de Ang II (0,001; 0,1 e 10µM), acrescido de insulina (100ng ml-1) e LH (100ng ̸ml) sobre a esteroidogênese nas células da teca bovina. O experimento 3 explorou os possíveis efeitos da Ang II por meio do tratamento de células da teca com saralasina (antagonista dos receptores da Ang II). Após 24 horas, nos experimentos 2 e 3, o meio de cultura foi coletado e avaliado quanto aos níveis de testosterona e androstenediona pela técnica de HPLC. Em paralelo, a expressão gênica de enzimas-chave da esteroidogênese (HSD3B2, CYP11A1, CYP17A1) e STAR foi avaliada por qRT-PCR. Não se observou diferença na produção de testosterona e androstenediona entre controle e grupos tratados, bem como, na expressão do RNAm para os genes estudados. Em conclusão, nossos resultados não demonstraram um papel da Ang II sobre a esteroidogenese nas células da teca bovina

The main objective of this study was to detect the steroidogenic effects of Ang II in bovine theca cells in vitro. Bovine theca cells were obtained from follicles (larger than 10mm of diameter) collected from a local abattoir and submitted to different treatments in a sequence of experiments. In experiment 1, CYP17A1 mRNA profile was evaluated in LH- (10ng ml-1) and Ang II-treated (0.1µM) theca cells. In experiment 2, a dose-response effect of Ang II (0.001; 0.1 e 10µM) plus insulin (100ng ml-1) and LH (100ng ml-1) was evaluated on steroidogenesis of bovine theca cells. Experiment 3 explored the effects of saralasin (an antagonist of Ang II receptors) on steroid production and steroidogenic enzymes regulation in theca cells. After 24 hours, culture media from experiments 2 and 3 was collected to evaluate testosterone and androstenedione levels by High-Performance Liquid Chromatography. In parallel, mRNA levels of key steroidogenic enzymes (HSD3B2, CYP11A1, CYP17A1) and STAR were assessed by RT-PCR. There was no difference in testosterone and androstenedione production between treated and controls groups, as well as in mRNA levels of the evaluated genes. In conclusion, the results suggest that Ang II does not regulate steroidogenesis in bovine theca cells

Neste trabalho foi avaliado o efeito do estresse calórico durante a maturação de oócitos sobre a produção in vitro de embriões ovinos. Os ovários foram obtidos em abatedouro e os oócitos colhidos de folículos de 2 a 6 mm de diâmetro. Após seleção, os oócitos, em 10 replicações, foram colocados para maturação in vitro (MIV) durante 24 horas. Os oócitos submetidos ao estresse térmico de 41º C durante 3, 6, 12, 18 e 24 horas foram posteriormente transferidos para completar a MIV a 39 ºC, mesma temperatura utilizada para maturação dos oócitos do grupo controle. O desenvolvimento dos embriões foi determinado nos dias 3, 4, 5 e 8 pós-fecundação. A avaliação da qualidade dos embriões foi efetuada através da contagem total de células coradas pelo DAPI e da determinação do número de blastômeros positivos para apoptose através do teste de TUNEL. Observou-se que o estresse térmico diminuiu (P < 0,05) a capacidade de maturação dos oócitos de acordo com o tempo de exposição à temperatura de 41º C. No grupo de oócitos incubados a 39° C, 70,70% maturou, enquanto que nos grupos expostos ao estresse térmico, apenas 45,28%, 35,17%, 12,30%, 9,74% e 4,60% maturaram, respectivamente, após 3, 6, 12, 18 e 24 horas de incubação. A duração de exposição dos oócitos ao estresse calórico foi inversamente proporcional (P < 0,05) à capacidade de desenvolvimento embrionário e diretamente proporcional (P < 0,05) ao número de blastocistos positivos para apoptose. Todavia, o efeito deletério do estresse térmico sobre a clivagem e os embriões nos estádios de 8 a 16 células e de mórula foi crescente (P > 0,05) somente até 18 horas de incubação. Os resultados permitem concluir que o estresse calórico durante a maturação in vitro de oócitos reduz a quantidade e a qualidade dos embriões ovinos produzidos in vitro determinadas pela alta incidência de apoptose.

The aim of this work was to evaluate the effect of heat stress during oocyte maturation on ovine in vitro embryo production. Ovaries were collected at abattoirs and oocytes retrieved from follicles ranging from 2 and 6 mm in diameter. After selection, all oocytes, in 10 replicates, were placed in in vitro maturation (IVM) during 24 hours. The oocytes were submitted to heat stress at 41º C during 3, 6, 12, 18 and 24 hours and were further transferred to 39º C in order to complete IVM, which was the temperature of maturation of control oocytes. Embryonic development was determined on days 3, 4, 5, and 8 post-fertilization. Embryo evaluation was performed as total cell count by DAPI staining and determination of positive blastomere for apoptosis by the TUNEL assay. We observed that heat stress diminishes (P < 0.05) oocyte maturation capacity in accordance with exposure time at 41º C. In the group of oocytes incubated at 39 ºC, 70.70% matured, while in the groups exposed to heat stress at 41º C, only 45.28%, 35.17%, 12.30%, 9.74% and 4.60% matured after 3, 6, 12, 18 and 24 hours of incubation, respectively. The duration of exposure to heat stress was inversely proportional (P < 0.05) to embryonic developmental capacity and directly proportional (P < 0.05) to the number of blastocysts positive to apoptosis. However, the cleavage rate and embryonic development from 8 to 16 cells and morulae stages were affected by heat stress (P > 0.05) only up to 18 hours of incubation. The results allow the conclusion that heat stress during oocyte in vitro maturation reduces the quantity and quality of ovine embryos produced in vitro determined by the high incidence of apoptosis.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficiência de dispositivos intravaginais (DIVs) contendo progestágeno na prevenção do parto e determinar o efeito do atraso do parto sobre a proporção de leitões vivos/nascidos totais. DIVs contendo 0,5, 1,0 ou 1,5g de progesterona (P4) não foram eficientes na prevenção do parto em nenhuma das doses. No experimento 2, setenta e cinco porcas aos 112 dias de gestação foram equilibradamente distribuídas (n=15 por grupo) nos seguintes tratamentos: prostaglandina (PGF2α; 250µg cloprostenol sódico; grupo controle) ou PGF2α e simultânea inserção de DIV contendo acetato de medroxiprogesterona (MAP) por 48h. Fêmeas do grupo controle iniciaram o parto 27,7±1,6h após injeção de PGF2α. O tempo médio entre a administração de PGF2α e início do parto foi 72,1±8,8h, 72,7±3,8h, 82,7±7,1h e 81,8±3,5h para os grupos MAP 100, 200, 400 e 800mg, respectivamente, diferindo do grupo controle (P<0,05). Para avaliar o efeito da inibição do parto sobre a proporção de leitões nascidos vivos, porcas entre 109 e 112 dias de gestação receberam DIVs contendo 800mg MAP (quintas-feiras) por 72h para prevenir o parto aos finais de semana e foram tratadas com PGF2α no momento da retirada dos DIV (aos domingos). A razão leitões vivos/nascidos totais foi 89,0±1,6, 90,1±1,2 e 89,0±1,5% nos grupos controle (Normal; n=57 porcas), induzido com PGF2α (Induzido; n=57 porcas) e PGF2α+DIV (MPA800; n=56 porcas), respectivamente (P>0,05). Esses resultados confirmam que DIVs contendo MAP podem efetivamente inibir o início do parto em porcas sem afetar a proporção de leitões nascidos vivos e, portanto, representam uma alternativa para evitar partos aos finais de semana.

The objective of this study was to evaluate the efficiency of progestagen intravaginal devices (IVDs) in preventing parturition in sows by determining the effect of delaying parturition on the alive/total born piglets ratio. Evaluations of IVDs containing 0.5, 1.0 or 1.5g progesterone (P4) showed they were not effective in delaying parturition at any dosage tested. In a second experiment, seventy-five sows at day 112 of pregnancy were equally distributed (n=15 per group) in the following treatments: prostaglandin (PGF2α; 250µg sodium cloprostenol; control group) or PGF2α and simultaneous insertion of an IVD containing medroxyprogesterone acetate (MPA) for 48h. Control sows initiated labor 27.7±1.6h after PGF2α injection. The mean time (±SEM) between PGF2α administration and parturition was 72.1±8.8h, 72.7±3.8h, 82.7±7.1h and 81.8±3.5h for MPA 100, 200, 400 and 800mg, respectively, differing from control group (P<0.05). To evaluate the effect of delaying parturition on the alive/total born piglets ratio at birth, sows between days 109 and 112 of gestation received IVDs containing 800mg MPA (on Thursdays) for 72h to prevent parturition in weekends and then were treated with PGF2α at the time of device withdrawal (on Sundays). The alive/total born piglets ratio was 89.0±1.6, 90.1±1.2 and 89.0±1.5% for control (Normal group; n=57 sows), PGF2α-induced (Induced group; n=57 sows), and IVD+PGF2α-induced (MPA800 group, n=56 sows) groups, respectively (P>0.05). These findings confirm that IVDs impregnated with MPA can effectively prevent parturition in sows without affecting the alive/total born piglets ratio and therefore represent an alternative to avoid weekend farrowing in swine herds.